Le Serial BlockFace SEM pour l’analyse ultrastructurale de grands volumes biologiques.

Nicolas BROUILLY, responsable de la
Plateforme de Microscopie Electronique, IBDM, UMR 7288, Case 907, Faculté des Sciences de Luminy, 13288 Marseille Cedex 09
nicolas.brouilly@univ-amu.fr

La vie que nous connaissons s’organise en 3D. Ne l’observer qu’en 2D, c’est prendre le risque de mal interpréter les structures observées.
Plusieurs techniques d’imagerie ultra-structurale 3D par microscopie électronique permettent d’analyser un échantillon biologique. Le choix de la technique à utiliser reposera principalement sur la résolution et le volume d’analyse nécessaire pour répondre à la question posée.

Après la présentation des différentes techniques à la disposition du biologiste, nous nous concentrerons sur une de ces techniques : le Serial BlockFace SEM.

Un microscope électronique à balayage est équipé d’un ultra-microtome sur la platine et d’un détecteur à électrons rétro-diffusés dédié. L’échantillon biologique est contrasté, inclus en résine et monté sur l’ultramicrotome. Une fois sous vide, le couteau diamant de l’ultramicrotome réalise des centaines de coupes à la surface de l’échantillon et, entre chacune d’elles, une image en électrons rétrodiffusés de la surface du bloc est réalisée pour révéler l’information ultrastructurale de l’échantillon.
Une fois les images alignées, nous pouvons reconstruire le volume analysé qui est typiquement de l’ordre de la centaine de microns.

Nous vous présenterons quelques exemples représentatifs et d’autres projets qui sortent un peu de l’ordinaire (corrélative RX/SBF, corrélative SEM/SBF-SEM, développements méthodologiques…).